Формировать у студентов представление о предмете и задачах биологической химии, специфике биохимических лабораторий и особенностях работы с биологическим




НазваниеФормировать у студентов представление о предмете и задачах биологической химии, специфике биохимических лабораторий и особенностях работы с биологическим
страница5/10
Дата публикации06.07.2013
Размер1.52 Mb.
ТипЗадача
zadocs.ru > Химия > Задача
1   2   3   4   5   6   7   8   9   10
^

Опыт 1. Обнаружение АТФ в различных тканях.


АТФ в виде нерастворимой бариевой соли осаждается из раствора в щелочной среде после добавления уксуснокислого бария.
Приборы. 1. Штатив с пробирками.

2. Ступка с пестиком.

3. Центрифуга
Реактивы. 1. Ткани животных (сердце, мозг, печень, скететная мышца, почки и т.д.).

2. ТХУ, 25%-ный раствор.

3. Фенолфталеин, 0,01%-ный раствор.

4. Гидроксид натрия, 10%-ный раствор.

5. Бария ацетат, 25%-ный раствор.


  1. Приготовьте 10%-ный раствор гомогената тканей сердца, мозга, печени, скелетной мышцы, почек и т.д.

  2. Для осаждения белка к 4 мл гомогената добавьте 4 мл 25%-ного раствора трихлоруксусной кислоты (ТХУ), перемешайте.

  3. Через 5 минут слейте в центрифужные пробирки и центрифугируйте 10 минут при 1500 об/мин.

  4. Надосадочную жидкость слейте в чистую пробирку.


Обнаружение АТФ.

  1. К 5 мл безбелкового фильтрата (надосадочная жидкость), добавьте 2 капли фенолфталеина и подщелачьте 10%-ным раствором NаОН до слабо розового окрашивания.

  2. При тщательном встряхивании пробирки добавить в нее по каплям 25%-ный раствор уксуснокислого бария до полноты осаждения, следя за тем, чтобы раствор после добавления уксуснокислого бария оставался щелочным (бледно-розовым).

  3. Объясните полученные результаты.


Опыт 2. Сопоставление окислительно-восстановительных потенциалов рибофлавина.
Приборы. 1. Штатив с пробирками.

2. Набор пипеток.

Реактивы. 1. Дистиллированная вода.

2. Рибофлавин, 0,025%-ный раствор.

3. Метиленовая синь, 0,01%-ный раствор.

4. Соляная кислота, концентрированная.
Для исследования окислительно-восстановительных потен­циалов применяют индикаторы, имеющие свой цвет при оп­ределенном значении этого потенциала.


  1. В пробирку с 4-6 каплями воды добавьте 3 капли взвеси рибофлавина (0,025% раствор) и по каплям 0,01% раствор метиленового синего до появления синего или сине-зеле­ного окрашивания.

  2. Внесите в пробирку кусочек цинка и 2-3 капли концентрированной НСl. Отметьте постепенное изменение окраски.

  3. Бледно-желтую жидкость слейте в широкую пробирку. Оцените цвет жидкости в пробирке через 10-15 минут.


Объясните наблюдаемые явления. Сопоставьте окислительно-восстановительный потенциал рибофлавина и метиленовой сини.

Опыт 3. Открытие альдегиддегидрогеназы в молоке.
Приборы. 1. Штатив с пробирками.

2. Набор пипеток.

3. Водяная баня.

4. Пробки.

Реактивы. 1. Молоко, кипяченое и некипяченое.

2. Формалин, 0,4%-ный раствор.

3. Метиленовая синь, 0,01%-ный раствор.



  1. Налейте в пробирки по 3 мл молока из пронумерованных колбочек соответственно (в одной из них молоко кипяченое, в другой  нет).

  2. В обе про­бирки внесите 6 капель 0,4%-ного раствора формальдегида и несколько капель 0,01%-ного раствора метиленовой сини (до появления голубого окрашивания).

  3. Пробирки встряхните и быстро закройте пробками для того, чтобы создать относительно анаэробные условия.

  4. Поместите пробирки в водяную баню (37оС) и отметьте постепенное обесцвечивание метиленовой сини через 5-10 минут (в зависимости от активности фермента) в одной из пробирок.

  5. После обесцвечивания содержимое пробирки несколько раз встряхните и наблюдайте за изменением цвета.


Определите, в какой пробирке содержалось некипяченое молоко? Объясните, почему Вы сделали такой вывод? Почему после встряхивания обесцвеченной пробирки произошло изменение цвета?


Опыт 4. Качественное определение креатинина.
Приборы. 1. Штатив с пробирками.

2. Набор пипеток.

3. Газовая горелка.

4. Держатели для пробирок.

Реактивы. 1. Мышечная ткань.

2. Пикриновая кислота, насыщенный раствор.

3. Гидроксид натрия, 10%-ный раствор.


  1. К 1-2 мл фильтрата мышечной ткани, свободного от белков1, добавьте 3 капли насыщенного раствора пикриновой кислоты (ядовита!).

  2. Проведите подщелачивание раствора добавлением нескольких капель 10%-ного гидроксида натрия. Через несколько минут появляется оранжево-красная окраска. Температура ускоряет реакцию.

  3. Проделайте опыт с фильтратами красных и белых мышечных волокон.

  4. Сделайте вывод о содержании креатинина в разных мышцах и причинах, обуславливающих это различие.


Дата выполнения ________ Балл ____ Подпись преподавателя ____________
^ Занятие № 11. «Цикл трикарбоновых кислот»
Цель занятия: изучить механизм некоторых реакций цикла Кребса. Освоить метод количественного определения пировиноградной кислоты в моче.
^ ВОПРОСЫ К КОНТРОЛЬНОЙ РАБОТЕ:

  1. Окислительное декарбоксилирование пирувата как предварительный этап цикла лимонной кислоты. Перечислите витамины и коферменты, задействованные в этом процессе.

  2. Реакции цикла лимонной кислоты. Что определяет общее направление реакций в цикле? В какой части клетки протекает этот процесс? Почему?

  3. Какие коферменты и витамины участвуют в цикле Кребса? Объясните, как они работают, с указанием конкретных реакций.

  4. Расскажите о реакциях цикла Кребса, в результате которых образуются НAДH2 и ФAДН2. Какова дальнейшая судьба этих соединений?

  5. Функции цикла трикарбоновых кислот. Объясните, какое значение для цикла лимонной кислоты имеет анаплеротическая реакция?

  6. Энергетический выход цикла трикарбоновых кислот. Сколько молекул ATФ образуется в ходе оборота через цикл одной молекулы лимонной кислоты? Все ли молекулы ATФ, образующиеся при полном окислении активного ацетила, синтезируются путем окислительного фосфорилирования. Как регулируется скорость цикла?


Дата выполнения ________ Балл ____ Подпись преподавателя ____________

Экспериментальная работа.
Одним из методов количественного анализа в биохимии является фотокалориметрия. Метод основан на измерении оптической плотности окрашенных растворов, которые получают при взаимодействии субстрата с различными химическими агентами. Концентрация субстрата пропорциональна степени окрашивания раствора.

Перед началом лабораторных опытов ознакомьтесь с устройством КФК и правилами работы на нем.

Опыт 1. Определение концентрации пировиноградной кислоты (ПВК) в моче.
Приборы. 1. Штатив с пробирками.

2. Набор пипеток.

3. Фотоколориметр.

4. Кюветы, 0,5 см.

Реактивы. 1. Дистиллированная вода.

2. Моча.

3. Гидроксид натрия, 10%-ный раствор.

4. 2,4-динитрофенилгидразин, раствор.
ПВК крови конденсируется с 2,4-динитрофинилгидразином с образованием гидразона, который в щелочной среде дает коричнево-красный цвет раствора. По интенсивности его окраски судят о содержании ПВК.


  1. В три пробирки внесите реактивы согласно следующей таблице:

Раствор

Опытная

проба, мл

Калибровочная проба, мл

Контрольная

проба, мл

Исследуемый образец

2

-

-

Калибр. раствор пирувата*

-

2

-

Дистиллированная вода

-

-

2

2,4-динитрофенилгидразин

0,8

0,8

0,8




  1. Содержимое пробирок на 15 мин поместите в темное место при комнатной температуре.

  2. В каждую пробирку внесите по 1 мл 10%-го раствора NаOH и через пять минут измерьте оптическую плотность при длине волны 620 нм опытной пробы против контрольной (О) и калибровочной пробы против контрольной (К).

  3. Расчет проведите по следующей формуле:

Концентрация ПВК =

  1. Расчет проведите и по готовому калибровочному графику.


Калибровочный график зависимости величины оптической плотности раствора (D) от концентрации ПВК в пробе.
Сравните полученные значения с нормальными величинами. Каковы причины повышенного содержания пировиноградной кислоты в сыворотке крови и моче?

*Стандартный, 1 мг%-ный раствор ПВК готовится из основ­ного раствора путем смешивания 5 мл основного раствора ПВК со 100 мл воды. Основной раствор ПВК готовят разведением 20 мг ПВК или 25 мг пирувата натрия в 100 мл дистиллированной воды.
Опыт 2. Определение активности сукцинатдегидрогеназы мышц.
Приборы. 1. Штатив с пробирками.

2. Набор пипеток.

3. Ступка с пестиком.

4. Водяная баня.

Реактивы. 1. Мышечная ткань.

2. Янтарная кислота, 5%-ный раствор.

3. Метиленовая синь, 0,01%-ный раствор.

4. Растительное масло.

5. Стеклянный песок.


  1. Взвесьте 1 г мышечной ткани.

  2. Поместите ткань в ступку, тщательно разотрите со стеклянным песком, добавляя 3-4 мл раствора 5%-ной янтарной кислоты.

  3. Полученный гомогенат перенесите поровну в 2 пробирки.

  4. Содержимое одной пробирки кипятите в водяной бане в течение 3-5 минут.

  5. Затем в обе пробирки добавьте по 1 капле раствора метиленовой сини, перемешайте и залейте поверхность жидкости 0,5 мл растительного масла для изоляции от кислорода воздуха. Обе пробирки инкубируйте в водяной бане (40оС) в течение 10 минут.


Дайте объяснение наблюдаемым явлениям. Какова функция метиленовой сини в данном эксперименте? На какое соединение эта функция возлагается в живой клетке?

Дата выполнения ________ Балл ____ Подпись преподавателя ____________

^ Занятие № 12. «Обмен углеводов (часть 1)»
Цель занятия: рассмотреть факторы, влияющие на переваривание углеводов; освоить метод количественного определения глюкозы в крови.
^ ВОПРОСЫ К КОНТРОЛЬНОЙ РАБОТЕ:

  1. Основные углеводы пищи, их характеристика. Биологическая роль и функции углеводов в организме.

  2. Переваривание угле­водов в желудочно-кишечном тракте у моногастричных животных. Ферменты, участвующие в переваривании углеводов. Нарушения переваривания углеводов.

  3. Механизмы трансмембранного переноса моносахаридов в клетки. Нарушения всасывания углеводов.

  4. Особенности переваривания углеводов у жвачных животных. Пути включения летучих жирных кислот (ЛЖК) в метаболизм.

  5. Метаболизм глюкозо-6-фосфата. Регуляция содержания глюкозы в крови. Биологическая значимость данного явления.

  6. Синтез гликогена: последовательность стадий и биологическое значение процесса.



Дата выполнения ________ Балл ____ Подпись преподавателя ____________

Экспериментальная работа.
Опыт 1. Воздействие формальдегида на активность амилазы.
Приборы. 1. Штатив с пробирками.

2. Набор пипеток.

3. Водяная баня.

Реактивы. 1. Крахмал, 1%-ный раствор.

2. Амилаза, раствор.

3. Йод, 1%-ный раствор.

4. Формальдегид, 5%-ный раствор.



  1. Возьмите две пробирки.

  2. В опытную пробирку налейте по 1 мл растворов крахмала, амилазы и 5%-ного формальдегида.

  3. В контрольную пробирку налейте по 1 мл раствора крахмала, амилазы и воды.

  4. Поместите пробирки на 20 минут в водяную баню при 30°С.

  5. В обе пробирки добавьте по 1 капле 1%-ного раствора йода.


Объясните полученные результаты. Где на практике животные могут столкнуться с формальдегидом?


Опыт 2. Определение концентрации глюкозы в биологических жидкостях ортотолуидиновым методом.

Для определения глюкозы в биологических жидкостях по данному методу в настоящее время различными фирмами выпускаются наборы реактивов. Поэтому суть работы сводится только к правильному использованию набора реактивов согласно инструкции по применению.
Глюкоза с ортотолуидином в кислой среде при повышенной температуре образует комплексное соединение сине-зеленого цвета. Интенсивность окраски раствора пропорциональна концентрации глюкозы в исследуемой пробе.
^ Определение без депротеинирования.
Без осаждения белков анализируют сыворотку и плазму крови, мочу. Мочу перед анализом разбавляют дистиллированной водой в соотношении от 1:10 до 1:500 и в после­дующем результат умножают на степень разведения.


  1. Приготовьте опытную, калибровочную и контрольную пробы по схеме:




Объем компонента (мл)

опытная проба

калибровочная проба

контрольная

проба

Рабочий раствор реактивов

(ортотолуидиновый реактив)

2,7

2,7

2,7

Исследуемый образец

0,3





Калибратор

(раствор глюкозы с известной концентрацией)



0,3



Дистиллированная вода





0,3




  1. Перемешайте. Закройте пробирки фольгой или крышкой.

  2. Поместите пробирки в кипящую водяную баню точно на 8 минут.

  3. Охладите пробирку под струей холодной воды.

  4. Измерьте оптическую плотность опытной (D1) и калибровочной (D2) проб против холостой пробы при длине волны 620 нм в кювете с толщиной поглощающего слоя 5 мм.


Рассчитайте концентрацию глюкозы по формуле:



где Х  концентрация глюкозы в калибровочном растворе.
Сравните полученные величины с нормальными значениями. Сделайте вывод о состоянии животного. В случае отклонения полученных значений от нормальных величин, предложите возможные причины, объясняющие данный результат.

Назовите факторы, вызывающие гипогликемию и гипергликемию в крови животных.

Опыт 3. Обнаружение сахара в моче с помощью качественной пробы Троммера.

Появление сахара в моче наблюдается при бешенстве, нервной форме чумы собак, нарушениях функции печени, панкреатической железы и др. У лошадей глюкозурия встречается реже, чем у собак. Лактозурия наблюдается при родильном парезе, воспалении вымени, закупорке сосудов, маститах.
Приборы. 1. Штатив с пробирками.

2. Набор пипеток.

3. Держатель для пробирок.

4. Газовая горелка.

Реактивы. 1. Моча.

2. Гидроксид натрия, 10%-ный раствор.

3. Сульфат меди, 2%-ный раствор.



  1. В пробирку налейте 3 мл мочи, 1 мл 10%-ного раствора гидроксида натрия.

  2. Осторожно, по каплям, добавляйте 2%-ный раствор сульфата меди до появления небольшой, неисчезающей при взбалтывании голубой мути гидроксида меди (II).

  3. Верхний слой жидкости нагрейте до кипения (не кипятите!).

  4. В течение 1 минуты (не дольше!) оцените цвет осадка. Образование желто-красного осадка свидетельствует о наличии сахара в моче. (Изменение цвета без осадка может быть при наличии муцина, мочевой кислоты и др.).


Сделайте вывод по результатам эксперимента.

Опыт 4. Полуколичественное определение глюкозы в моче.
Приборы. 1. Ступка с пестиком.

2. Весы.

3. Предметное стекло.

4. Газовая горелка.

5. Пипетка.

Реактивы. 1. Моча.

2. Сульфат меди, кристаллический.

3. Карбонат натрия, кристаллический.


  1. В ступке разотрите в тонкий порошок 1 г сульфата меди и 10 г карбоната натрия.

  2. На предметное стекло насыпьте немного порошка и нанесите несколько капель мочи.

  3. Подогрейте до кипения. Синий цвет означает, что глюкозы нет, желтовато-зеленый означает, что глюкозы не более 0,5 %, зеленый – не более 1%, коричнево-красный – до 2%, интенсивно красный – свыше 2%.


Запишите Ваши результаты. Сравните результаты с предыдущим опытом.

Дата выполнения ________ Балл ____ Подпись преподавателя ____________
1   2   3   4   5   6   7   8   9   10

Похожие:

Формировать у студентов представление о предмете и задачах биологической химии, специфике биохимических лабораторий и особенностях работы с биологическим iconЛабораторно – практические занятия по биологической химии
Учебное пособие предназначено для студентов педиатрического и стоматологического факультетов медицинских вузов. Материалы пособия...

Формировать у студентов представление о предмете и задачах биологической химии, специфике биохимических лабораторий и особенностях работы с биологическим iconЭкзаменационные вопросы по биохимии для 2 курса лечебного факультета...
Предмет и задачи биологической химии. Объекты биохимического исследования. Место биохимии среди других биологических дисциплин. Основные...

Формировать у студентов представление о предмете и задачах биологической химии, специфике биохимических лабораторий и особенностях работы с биологическим iconОбратимые электроды и электролиз
Стороженко Валентина Николаевна; кандидат химических наук, доцент кафедры органической, биологической и физколлоидной химии Летичевская...

Формировать у студентов представление о предмете и задачах биологической химии, специфике биохимических лабораторий и особенностях работы с биологическим iconВопросы к экзамену по химии для студентов фбо (ЗП)
...

Формировать у студентов представление о предмете и задачах биологической химии, специфике биохимических лабораторий и особенностях работы с биологическим iconПрактикум по биологической химии, изданный в 1986 году, подвергся...
Практикум содержит лабораторные работы разной степени сложности, позволяющие студентам приобрести навыки самостоятельного биохимического...

Формировать у студентов представление о предмете и задачах биологической химии, специфике биохимических лабораторий и особенностях работы с биологическим iconМатериалы для подготовки к лабораторной работе №1 «Исследование дисперсии...
Цель работы: экспериментальное определение частотной дисперсии электропроводности биологической ткани, определение импеданса биологической...

Формировать у студентов представление о предмете и задачах биологической химии, специфике биохимических лабораторий и особенностях работы с биологическим iconПостановление от 19 июня 2012 г. N 602 об аккредитации органов по...
По сертификации и испытательных лабораторий (центров),выполняющих работы по подтверждению соответствия,аттестации экспертов по аккредитации,...

Формировать у студентов представление о предмете и задачах биологической химии, специфике биохимических лабораторий и особенностях работы с биологическим iconСамостоятельная работа студентов по биологической химии Методические...
Методические рекомендации предназначены для студентов-медиков и являются руководством в самостоятельной подготовке к семинарам и...

Формировать у студентов представление о предмете и задачах биологической химии, специфике биохимических лабораторий и особенностях работы с биологическим iconМетодические указания к проведению лабораторных работ по биологической...
Методические указания составлены сотрудниками кафедры биохимии и фармакологии медицинского факультета БелГУ: кандидатом биологических...

Формировать у студентов представление о предмете и задачах биологической химии, специфике биохимических лабораторий и особенностях работы с биологическим iconВопросы по биохимии
Предмет и задачи биологической химии. Место биохимии среди других биологических наук

Вы можете разместить ссылку на наш сайт:
Школьные материалы


При копировании материала укажите ссылку © 2013
контакты
zadocs.ru
Главная страница

Разработка сайта — Веб студия Адаманов