Исследование мочи




НазваниеИсследование мочи
страница7/12
Дата публикации20.12.2013
Размер1.52 Mb.
ТипИсследование
zadocs.ru > Медицина > Исследование
1   2   3   4   5   6   7   8   9   ...   12

^ БИОХИМИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

Ортотолуидиновыи метод определения сахара (глюкозы) в крови

Принцип. Глюкоза при нагревании с ортотолуиди-ном в растворе уксусной кислоты дает соединение, окра­шенное в зеленый цвет, интенсивность которого пропор­циональна концентрации глюкозы.

Реактивы:

1. Ортотолуидиновыи реактив. 0,15 г тиомочевины ра­створяют в 94 мл х.ч. ледяной уксусной кислоты и сме­шивают с б мл бесцветного ортотолуидина. Реактив стоек. Хранится на холоде.

2. Тиомочевина, х.ч.

3. Ледяная уксусная кислота, х.ч.

4. Стандартный раствор глюкозы. Содержит 1000 мг глюкозы в 100 мл 0,2% раствора бензойной кислоты. 1000 мг подсушенной при 100° С и охлажденной в экси­каторе глюкозы растворяют в 100 мл 0,2% раствора бен­зойной кислоты. При отсутствии бензойной кислоты стандартный раствор глюкозы можно приготовить сле­дующим образом: 1000 мг подсушенной глюкозы поме­щают в колбу на 100 мл, туда же добавляют 0,3 г бен-зойнокислого натрия и 2,0 мл 1 н. раствора серной кис­лоты. Доливают до метки водой.

Ход определения. В опытные пробы прилива­ют по 0,1 мл негемолизированной сыворотки и 2,5 мл ортотолуидинового реактива. Тщательно перемешивают. Пробирку со смесью помещают в кипящую (100° С) во­дяную баню на 10 мин. Охлаждают пробирку в проточ­ной воде и фотометрируют. Одновременно с опытной ставят контрольную пробу, которую обрабатывают точ­но так же, как и опытную. Контрольная проба содержит 0,1 мл воды и 2,5 мл ортотолуидинового реактива. Из­мерение проводят на фотоэлектроколориметре (рис. 15) против контроля на реактивы в кювете толщиной 5 мм при длине волны в 610 нм (оранжевый фильтр).

57

Расчет. Содержание глюкозы С„п в крови ммоль/л в опытных пробах рассчитывают по калибровочной кри­вой или по стандартному раствору глюкозы по формуле



где Сст — концентрация глюкозы в стандартной про­бе, мг/л;

Eon — оптическая плотность пробы;

Ест — оптическая плотность стандарта.

Построение калибровочной кривой. Из основного стандартного раствора глюкозы — 55,5 ммоль/л (1000 мг/100 мл) берут 8, 10, 20, 30, 40 мл и доливают 0,2% раствором бензойной кислоты до 100 мл. Полученные рабочие стандартные растворы со­держат соответственно 4,44, 5,55, 11,1, 16,65, 22,2 ммоль/л глюкозы. В пробирки вносят по 0,1 мл соответствующих стандартных растворов глюкозы и по 2,5 мл ортотолуидинового реактива.

Стандартные пробы обрабатывают так же, как и опытные. Измерения проводят на фотоэлектроколори-

мстре против контроля на реактивы в кювете толщиной 5 мм при длине волны 610 им. Полученные значения используют для построения калибровочной кривой.

При концентрации глюкозы выше 22,2 ммоль/л ис­ходное количество крови уменьшают в 2 раза и иссле­дования повторяют.

Нормальное содержание глюкозы в сыворотке кро­ви человека, определяемое ортотолуидиновым методом, составляет 3,58—5,0 ммоль/л.

^ Экспресс-метод определения концентрации глюкозы в крови с помощью реактивной бумаги «Декстронал»

Принцип. Основа разработки бумаги «Декстро­нал» (ГДР) та же, что и основа разработки бумаги «Глюкотест».

Бумага «Декстронал» представляет собой ленточку, на нижнем конце которой имеется индикаторная по­лоска серовато-желтого цвета, пропитанная растворами ферментов.

Ход определения. Каплю крови, взятой из пальца, помещают на индикаторную полоску и тотчас отмечают время по секундомеру. Точно через 60 с кровь смывают под струёй водопроводной воды (или стирают влажной ваткой) и производят, сравнение об­разовавшегося цвета с цветами прилагаемой к ком­плекту шкалы (подводя полоску под соответствующие отверстия этой шкалы). Сравнение необходимо произ­водить не позже чем через 10 с после удаления крови, так как в дальнейшем цвет пятна на индикаторной зо­не бледнеет.

Цвета шкалы соответствуют следующим значениям концентраций глюкозы: 40±20, 90±30, 140±30, 200 ± ±50, 300±60, 500+100, 800±200 мг/100 мл.

При значительной гипогликемии пятно на индика­торной полоске после удаления крови вообще не по­является.

^ Определение белка в сыворотке крови биуретовым

методом

В сыворотке крови здорового человека содержится 65—85 г/л белка. Снижение содержания белка крови

по сравнению с нормой называется гипопротеинемией, повышение — гиперпротеинемией.

Принцип. Белки реагируют в щелочном растворе с сульфатом меди с образованием соединений, имеющих фиолетовую окраску (биуретовая реакция).

Реактивы:

1. 0,9% раствор хлорида натрия.

2. 0,2 н раствор едкого натра.

3. Биуретовый реактив (4,5 г ссгнетовой соли раст­воряют в 40 мл 0,2 н раствора едкого натра, затем при­бавляют 1,5 г сульфата меди, 5 мл воды и 0,5 г йодида калия. Раствор доливают до 100 мл 0,2 н раствором ед­кого натра). Хранится в темном месте.

4. Рабочий раствор биуретового реактива: 20 мл биуретового реактива и 80 мл раствора йодида калия (0,5 г йодида калия растворяют в 100 мл 0,2 н раство­ра едкого натра). Хранится в темном месте не более

2 нед.

5. Стандартный раствор белка. Для стандарта бе­рут 1 г альбумина и растворяют до 10 мл 0,9% раство­ром хлорида натрия.

Ход определения. 0,1 мл сыворотки (точно!) и 5,0 мл рабочего раствора биуретового реактива сме­шивают, избегая образования пены. Через 30 мин (и не позднее чем через час) колориметрируют на фотоэлек-троколориметре, кювета 1 см, длина волны 546 нм (540—560 нм), фильтр зеленый против контроля.

Контроль. 5,0 мл биуретового реактива (рабо­чий раствор) и 0,1 мл 0,9% раствора хлорида натрия.

Расчет ведется по калибровочной кривой.

Построение к алибровочной к р и в о и. Стандартный раствор белка содержит 0,1 г сыворо­точного альбумина в 1 мл 0,9% раствора хлорида нат­рия. Схема разведения стандартного раствора белка

приведена в табл. 2.

Таблица 2

^ Схема разведения стандартного раствора белка

№ пробирки

Стандартный раствор белка, мл

U,n% расгвор хлорида нат­рия, мл

Содержание

белка в про­бе, г

Концентрация белка, r/л

,

0,4

0,6

0,04

40

2

0.6

0,4

0,06

63

3

0,8

0,2

0,08

83

4

1,0



0,1

ioq


К 0,1 мл каждой смеси прибавляют 5,0 мл биурето­вого реактива (рабочий раствор); через 30—60 мин ко­лориметрируют на фотоэлектроколориметре так же, как и в опыте против контроля. По полученным данным строят калибровочную кривую.

Примечание. Если в сыворспке находится большое коли­чество 6e.iitd (свыше 100 г/л). то ее разводят пополам изотоническим раствором хлорида натрия, берут 0,1 мл смеси и полученные дан­ные умножают на 2.

^ Определение общего белка по относительной плотности сыворотки крови

Принцип. Относительная плотность сыворотки за­висит в основном от содержания в ней белка. Опреде­лить относительную плотность сыворотки можно с по­мощью серии растворов сульфата меди с заранее известной относительной плотностью. При определении белка этим методом нельзя использовать сыворотку с высоким содержанием сахара, билирубина и гемолизи-рованную.

Реактивы:

1. Основной раствор сульфата меди' точно отвешен­ные 158,54 г сульфата меди (CuS04-5H20) помещают в мерную колбу на 1000 мл, вливают в нее около 900мл дистиллированной воды, перемешивают до полного ра­створения соли и доводят водой до метки. Полученный раствор имеет относительную плотность 1,100.

2. Рабочие растворы сульфата меди готовят из ос­новного раствора по схеме, приведенной в табл. 3, в которой указано, сколько миллилитров основного раст­вора надо взять и довести его объем до 100 мл водой, чтобы получить раствор нужной относительной плотно­сти. Рабочие растворы разливают по флаконам, на ко­торые наклеивают этикетки с указанием относительной плотности раствора. Растворы, закрытые притертыми пробками, можно хранить в холодильнике и использо­вать длительное время. Перед определением содержа­ния белка растворы берут из холодильника и дают им согреться до комнатной температуры. Капли сыворотки, оставшиеся от предыдущих исследований, находятся на дне флакона и дальнейшей работе не мешают. 100 мл рабочего раствора хватает на 100 определений.

Ход определения. Из пипетки с высоты 1—2 см В отдельные рабочие растворы выпускают по капле сы-

61

Таблица 3

Зависимость между относительной плотностью сыворотки и концентрацией белка

№ п/п

Количество станд

артного раствора, мл



Относительная

Плотность сыворотки

Содержание белка, г/л

1

14,26

1315

30 1

2

14,76



32,0

3

15,25

1016

33,8

4

15,75



35,7

5

16,24

1И7

37,6

6

16,74



39,5

7

17,23

1313

41,4

8

17,73



43,3

Ч

18,22

1313

45,1

13

18,72



47,0

11

19,21

1323

48,9

12

19,71



50,8

13

20,20

1021

52,6

14

20,70



54,6

15

21,19

1322

56,4

16

21,68



58,3

17

22,17

1Э23

60,2

13

22,66



62,1

1)

23,15

1324

63,9

2)

23,65



65,8

21

24,14

1Э23

67,7

22

24,63



Ь9,б

23

25,12

132.

71,4

24

25,61



73,3

25

26,10

1327

75,2

26

26,59



77,1

27

27,08

1023

79,0

28

27,57



80,9



28,06

1023

82,7

30

2855



84,6

31

29,04

1ЭЗО

86,5

32

29,52



88,4

33

30,00

1031

90,2

Ч! о х

30,50



92,1

35

31,00

1032

94,0

36

31,50



95,9

37

32,00

1033

97,8

38

32.50



99,7

л

^ J

33,00

103t

101,5

40

33,50



103,4


62

воротки и 10 с следят за поведением капли. Относи­тельная плотность раствора, в котором капля в течение 10 с будет находиться во взвешенном состоянии, т. е. не всплывет и не пойдет на дно, будет равна относитель­ной плотности сыворотки. По табл. 3 определяют со­держание белка в сыворотке.
1   2   3   4   5   6   7   8   9   ...   12

Похожие:

Исследование мочи iconИсследование пульса, его характеристики
Осуществление сбора мочи по Зимницкому, Нечипоренко, для общего анализа и на стерильность

Исследование мочи iconКлинический анализ мочи (ока мочи). Материалы, методика, интерпретация результатов
Ют утром в сухую, чистую посуду (флакон для мочи с красной крышкой). Желательно собирать мочу в тот сосуд, в котором она будет доставлена...

Исследование мочи iconЗадача №1
Размер железы 2,8х3,5х3 Остаточной мочи 150 мл. Содержание мочевины в сыворотке крови 7,8 ммоль/л. Общий анализ крови и мочи в норме....

Исследование мочи iconХимизм и энергетика мышечного сокращения. Снефрон как морфофункциональная...
Механизмы фильтрации. Состав первичной мочи. Особенности кровообращения в почке. Л

Исследование мочи iconНочной энурез (НЭ) это состояние непроизвольного мочеиспускания во...
Ночное недержание мочи является «детской болезнью», хотя она может встречаться в любом возрасте. Если мокрые пеленки грудного младенца...

Исследование мочи iconИсследование: установление контакта с сопротивлением 75 Самостоятельное...
Седона-метод: Избавьтесь от эмоциональных проблем и живите так, как всегда мечтали. 1

Исследование мочи iconИсследование: установление контакта с сопротивлением 64 Самостоятельное...
Седона-метод: Избавьтесь от эмоциональных проблем и живите так, как всегда мечтали. 1

Исследование мочи iconИсследование: установление контакта с сопротивлением 64 Самостоятельное...
Седона-метод: Избавьтесь от эмоциональных проблем и живите так, как всегда мечтали. 1

Исследование мочи iconИсследование секрета простаты
Общеклиническое исследование отделяемого мочеполовых органов (клеточный состав, микрофлора)

Исследование мочи iconЭкзаменационные вопросы по дисциплине «Маркетинг»
Процесс маркетинговых исследований. Исследование рынка и исследование потенциальных возможностей фирмы

Вы можете разместить ссылку на наш сайт:
Школьные материалы


При копировании материала укажите ссылку © 2013
контакты
zadocs.ru
Главная страница

Разработка сайта — Веб студия Адаманов