Конспект лекции № Тема. Субклеточный и клеточный уровни организации живого




Скачать 154.97 Kb.
НазваниеКонспект лекции № Тема. Субклеточный и клеточный уровни организации живого
Дата публикации31.01.2014
Размер154.97 Kb.
ТипКонспект
zadocs.ru > Спорт > Конспект


Конспект лекции № 3.

Тема. Субклеточный и клеточный уровни организации живого.

Строение биологических мембран.

О
снова биологической мембраны всех живых организмов- это двойная фосфолипидная структура. Фосфолипиды клеточных мембран представляют собой триглицериды, у которых одна из жирных кислот замещена на фосфорную кислоту. Гидрофильные "головки" и гидрофобные "хвостики" фосфолипидных молекул ориентированы так, что возникает два ряда молекул, головки которых прикрывают от воды "хвостики".

В такую фосфолипидную структуру интегрированы разные по величине и форме белки.

Индивидуальные свойства и особенности мембраны определяются преимущественно белками. Разный белковый состав определяет разницу строения и функций органоидов любых видов животных. Влияние состава липидов мембран на их свойства значительно ниже.

^ Транспорт веществ через биологические мембраны.

Т
ранспорт веществ через мембрану делят на пассивный (без затрат энергии по градиенту концентрации) и активный (с затратами энергии).

Пассивный транспорт: диффузия, облегченная диффузия, осмос.

Диффузия - это движение растворенных в среде частиц из зоны с высокой концентрацией в зону с низкой концентрацией (растворение сахара в воде).

Облегченная диффузия - это диффузия с помощью белка-канала (поступление глюкозы в эритроциты).

Осмос - это движение частиц растворителя из зоны с меньшей концентрацией растворенного вещества в зону с высокой концентрацией (эритроцит в дистиллированной воде набухает и лопается).

Активный транспорт делят на транспорт, связанный с изменением формы мембраны и транспорт белками-ферментами-насосами.

В свою очередь, транспорт, связанный с изменением формы мембран, делят на три вида.

Фагоцитоз - это захват плотного субстрата (лейкоцит-макрофаг захватывает бактерию).

Пиноцитоз - это захват жидкостей (питание клеток зародыша на первых стадиях внутриутробного развития).

Транспорт белками-ферментами-насосами - это передвижение вещества через мембрану с помощью белков-переносчиков, интегрированных в мембрану (транспорт ионов натрия и калия "из" и "в" клетку, соответственно).

По направлению транспорт делят на экзоцитоз (из клетки) и эндоцитоз (в клетку).

^ Классификация составных частей клетки проводится по различным критериям.

По наличию биологических мембран органоиды делят на двумембранные, одномембранные и немембранные.

По функциям органоиды можно разделить на неспецифические (универсальные) и специфические (специализированные).

По значению при повреждении на жизненноважные и восстановимые.

По принадлежности к разным группам живых существ на растительные и животные.

Мембранные (одно- и двумембранные) органоиды имеют сходное с точки зрения химии строение.

^ Двумембранные органоиды.

Ядро. Если клетки организма имеют ядро, то их называют эукариотами. Ядерная оболочка имеет две близкорасположенные мембраны. Между ними находится перинуклеарное пространство. В ядерной оболочке есть отверстия - поры. Ядрышки - это части ядра ответственные за синтез РНК. В ядрах некоторых клеток женщин в норме выделяется 1 тельце Барра - неактивная Х-хромосома. При делении ядра становятся заметны все хромосомы. Вне деления хромосомы, как правило, не видны. Ядерный сок - кариоплазма. Ядро обеспечивает хранение и функционирование генетической информации.

Митохондрии. Внутренняя мембрана имеет кристы, которые увеличивают площадь внутренней поверхности для ферментов аэробного окисления. Митохондрии имеют свою ДНК, РНК, рибосомы. Главная функция - завершение окисления и фосфорилирование АДФ

АДФ+Ф=АТФ.

Пластиды (хлоропласты, хромопласты, лейкопласты). Пластиды имеют собственные нуклеиновые кислоты и рибосомы. В строме хлоропластов имеются дискообразные мембраны, собранные в стопки, где находится хлорофилл, ответственный за фотосинтез.

Хромопласты имеют пигменты, которые определяют желтую, красную, оранжевую окраску листьев, цветков и плодов.

Лейкопласты запасают питательные вещества.

^ Одномембранные органоиды.

Наружная цитоплазматическая мембрана отделяет клетку от внешней среды. Мембрана имеет белки, которые выполняют разные функции. Различают белки-рецепторы, белки-ферменты, белки-насосы, белки-каналы. Наружная мембрана обладает избирательной проницаемостью, обеспечивая транспорт веществ через мембрану.

У некоторых мембран выделяют элементы надмембранного комплекса - клеточная стенка у растений, гликокаликс и микроворсинки клеток эпителия кишечника у людей.

Имеется аппарат контакта с соседними клетками (например, десмосомы) и субмембранный комплекс (фибриллярные структуры), обеспечивающий устойчивость и форму мембраны.

Эндоплазматическая сеть (ЭПС) - это система мембран, образующих цистерны и каналы для взаимосвязей внутри клетки.

Различают гранулярную (шероховатую) и гладкую ЭПС.

На гранулярной ЭПС имеются рибосомы, где происходит биосинтез белков.

На гладкой ЭПС синтезируются липиды и углеводы, окисляется глюкоза (бескислородный этап), обезвреживаются эндогенные и экзогенные (ксенобиотики-чужеродные, в том числе, лекарственные) вещества. Для обезвреживания на гладкой ЭПС имеются белки-ферменты, катализирующие 4 главных типа химических реакций: окисление, восстановление, гидролиз, синтез (метилирование, ацетилирование, сульфатирование, глюкуронирование). В содружестве с аппаратом Гольджи ЭПС принимает участие в формировании лизосом, вакуолей и других одномембранных органоидов.

Аппарат Гольджи (пластинчатый комплекс) - это компактная система из плоских мембранных цистерн, дисков, пузырьков, которая тесно связана с ЭПС. Пластинчатый комплекс принимает участие в формировании оболочек (например, для лизосом и секреторных гранул) отграничивающих гидролитические ферменты и другие вещества от содержимого клетки.

Лизосомы - пузырьки с гидролитическими ферментами. Лизосомы активно участвуют во внутриклеточном пищеварении, в фагоцитозе. Они переваривают захваченные клеткой объекты, сливаясь с пиноцитарными и фагоцитарными пузырьками. Могут переваривать собственные изношенные органоиды. Лизосомы фагов обеспечивают иммунную защиту. Лизосомы опасны тем, что при разрушении их оболочки может произойти аутолизис (самопереваривание) клетки.

Пероксисомы - это мелкие одномембранные органоиды, содержащие фермент каталазу, который нейтрализует перекись водорода. Пероксисомы - это органоиды защиты мембран от свободнорадикального перекисного окисления.

Вакуоль - это одномембранные органоиды, характерные для растительных клеток. Их функции связаны с поддержанием тургора и (или) запасанием веществ.

^ Немембранные органоиды.

Рибосомы - это рибонуклеопротеиды, состоящие из большой и малой субъединиц р-РНК. Рибосомы являются местом сборки белка.

Фибриллярные (нитеобразные) структуры - это микротрубочки, промежуточные филаменты и микрофиламенты.

Микротрубочки. По строению напоминают бусы, нить которых завита в плотную пружину-спираль. Каждая "бусинка" представляет собой белок-тубулин. Диаметр трубочки 24 нм. Микротрубочки - это часть системы каналов, обеспечивающих внутриклеточный транспорт веществ. Они укрепляют цитоскелета, принимают участие в формировании веретена деления, центриолей клеточного центра, базальных телец, ресничек и жгутиков.

Клеточный центр - участок цитоплазмы с двумя центриолями, образованными из 9 триплетов (по 3 микротрубочки). Таким образом, каждая центриоль состоит из 27 микротрубочек. Считается, что клеточный центр является базой для формирования нитей веретена деления клетки.

Базальные тельца - это основания ресничек и жгутиков. На поперечном разрезе реснички и жгутики имеют девять пар микротрубочек по окружности и одну пару в центре, всего 18+2=20 микротрубочек. Реснички и жгутики обеспечивают движение микроорганизмов и клеток (сперматозоиды) в среде их обитания.

Промежуточные филаменты имеют диаметр 8-10 нм. Они обеспечивают функции цитоскелета.

Микрофиламенты с диаметром 5-7 нм преимущественно состоят из белка актина. Во взаимодействии с миозином они отвечают не только за мышечные сокращения, но и за сократительную активность не мышечных клеток. Так, изменения формы мембраны при фагоцитозе и активность микроворсинок объясняют работой микрофиламентов.

Включения - это скопления вещества в клетке, которые не ограничены внутриклеточными мембранами (капли жира, глыбки гликогена).

Деление органоидов на неспецифические (универсальные) и специфические (специализированные) достаточно условно. К органоидам специального назначения относят реснички и жгутики, микроворсинки, мышечные микрофиламенты.

Животные клетки отличаются от растительных отсутствием целлюлозы и клеточной стенки, вакуолей с клеточным соком, пластид. Растительные клетки высших растений не имеют ресничек и жгутиков. У растений нет центриолей.

При повреждении ядра, и митохондрий (отравление цианидами) неизбежна смерть клетки, так как блокирована информация и энергия. Ядро и митохондрии относят к жизненноважным органоидам. При разрушении других органоидов существует принципиальная возможность их восстановления.

^ Свободнорадикальное (перекисное) окисление мембран и их антиоксидантная защита.

Важным механизмом повреждения клеточных мембран является свободнорадикальное (перекисное) окисление. Этот универсальный механизм повреждения встречается в патогенезе гепатитов, инфаркта миокарда, панкреатита и других болезней. В норме умеренное образование свободных радикалов (активные формы кислорода, перекись водорода и другие вещества с незавершенным внешним электронным слоем) постоянно происходит в клетке. Свободные радикалы постоянно атакуют мембраны клеток (особенно "хвосты" фосфолипидов), что может нарушить их структуру и функции. Этому успешно противостоят антиоксидантные системы: экзогенная (препараты селена, витамины Е, С) и эндогенная (ферменты каталаза, супероксиддисмутаза, убихинон).

При интенсификации образования свободных радикалов под влиянием повреждающих факторов болезни (вирусы, радиация) происходит резкое увеличение перекисного окисления липидов (ПОЛ) мембран и нарушение их функций.

Поиск эффективных антиоксидантов ведет к созданию новых действенных препаратов для лечения заболеваний, которые сопровождаются интенсификацией ПОЛ.

Клетка представляет собой сложную структуру, состоящую из разнообразных органоидов и клеточных жидкостей (цитозоль, гиалоплазма, кариоплазма…). По строению и наличию клеток все живые организмы делят на 3 группы: прокариоты, эукариоты, вирусы.

Прокариоты – безъядерные клетки. Основные представители прокариотов бактерии, сине-зеленые водоросли.

Эукариоты – клетки содержащие ядра. Основные представители эукариотов: животные, растения, грибы.

Вирусы (в т.ч. бактериофаги) не имеют клеточного строения, но они не проявляют признаков жизни вне контакта с клетками прокариотов и эукариотов. По этой причине предположение клеточной теории Шванна и Шлейдена о невозможности жизни вне клеток не потеряло своей актуальности и после открытия вирусов.
^ Методические указания для самоподготовки к занятию № 3.

Тема. Мембраны и органоиды клетки. Клеточная теория.

Цель самоподготовки. Расширить и закрепить представления по вопросам темы.

Вопросы для самостоятельного изучения задания.

  1. Современные представления о составе липидов мембран клетки.

  2. Влияние состава мембран на их свойства.

  3. Лабильность и стабильность липидного бислоя.

  4. Липосомы и мицеллы.

  5. Значение знаний о составе липидов мембран клетки. Примеры из фармакологии и токсикологии.

Блок дополнительной информации.

Мембранные липиды.

Рис. 1. Схема строения клеточной мембраны.



В состав мембран входят липиды следующих классов:

1 - фосфолипиды (ФЛ),

2- сфинголипиды (СЛ),

3- гликолипиды (ГЛ),

4- стероиды, а именно холестерин (ХС).

Рис.2. Классы мембранных липидов



Именно липиды первых трех перечисленных классов имеют то характерное строение (гидрофильная «головка» и два гидрофобных «хвоста»), которое показано в общем виде на рис. 1.

^ У фосфолипидов (ФС) (рис. 2а) в состав «головки» обычно входят последовательно связанные друг с другом остатки азотсодержащего основания (холина, коламина или серина), фосфатной группы и трехатомного спирта глицерина. Всё это полярные группировки (поскольку содержат много гетероатомов), и потому они являются гидрофильными. Остатки же жирных кислот (ЖК), образующие гидрофобные «хвосты», соединены с глицерином. В качестве насыщенной кислоты часто выступает пальмитиновая кислота, а в качестве ненасыщенной — олеиновая кислота. В месте нахождения двойной связи углеводородная цепь делает изгиб на 40°. Поэтому, несмотря на различие С- атомов в олеиновой и пальмитиновой кислотах, длина обоих «хвостов» оказывается практически одинаковой. Это облегчает образование двойного слоя (бислоя).

В мембранах имеются и такие ФЛ, чья структура несколько отличается от схемы, приведенной на рис. 2а. Например, кардиолипины (рис. 3) — это две фосфатидные кислоты, связанные друг с другом через глицерин. Соответственно, в этих молекулах — 4 углеводородных «хвоста» и более объемная, чем обычно, гидрофильная «головка».
Рис. 3. Схема кардиолипина.



Сфинголипиды (СЛ, рис. 2б), по сравнению с ФЛ, состоит в том, что вместо глицерина и одной из жирных кислот они включают сфингозин (он же сфингенин) — двухатомный аминоспирт, содержащий 18 С-атомов и 1 двойную связь. Поэтому начальная часть сфингозина входит в гидрофильную «головку» СЛ, а последующая углеводородная цепь служит одним из гидрофобных «хвостов».

Типичный представитель СЛ — сфингомиелин, где в качестве азотсодержащего основания выступает холин.

Гликолипиды (ГЛ, рис. 2в) тоже содержат остаток сфингозина. Но в состав гидрофильной «головки» вместо азотсодержащего основания и фосфатной группы входит какой-либо углевод (У). По природе последнего ГЛ подразделяются на две группы: цереброзиды (здесь У — галактоза или глюкоза) и ганглиозиды (У — олигосахарид, причем обычно разветвленный). В качестве же ЖК гликолипиды часто содержат особые кислоты — нервоновую или цереброновую. Так, первая из них содержит 24 С-атома и 1 двойную связь 24Л).

Несколько особняком стоит структура четвертого класса мембранных липидов — стероидов, точнее, их основного представителя — холестерина (ХС). Он (рис. 4.), как известно, представляет собой вытянутую систему четырех углеводородных циклов и углеводородную же боковую цепь. За исключением одной гидроксигруппы, ХС — гидрофобное соединение.

Рис. 4. Холестерин в структуре мембраны.


В силу своей гидрофобности, в мембране ХС находится, в основном, в срединной зоне бислоя, и лишь гидроксигруппа примыкает к «головкам» липидов. При этом вытянутые молекулы ХС ориентированы параллельно углеводородным цепям указанных липидов.

Каждый вид мембран отличается строго определенным содержанием вышеперечисленных классов липидов. И это во многом определяет свойства данных мембран.

Отношение белок/липиды в среднем близко к 1:1, но в ряде случаев оно значительно отклоняется от этого уровня. Миелиновые оболочки сильно обогащены липидами, а внутренняя мембрана митохондрий — белками.

Внешние мембраны значительно богаче внутренних по содержанию таких компонентов, как углеводы, сфинго- и гликолипиды, холестерин.

ГЛ и ХС условно называют «стабилизирующие». Во внутренних мембранах таких липидов почти нет, т. е. соотношение сильно сдвинуто в сторону «дестабилизирующих» липидов — в основном ФЛ.

Влияние ФЛ и СЛ. Эти липиды, как мы знаем, включают непредельные углеводородные «хвосты». Причем среди них встречаются остатки не только олеиновой кислоты, но и полиненасыщенных кислот — линолевой, линоленовой, арахидоновой и других. Но, известно, в каждом месте нахождения двойной связи углеводородная цепь имеет изгиб. А изгибы затрудняют взаимодействие соседних цепей, что делает структуру бислоя менее упорядоченной. Поэтому по мере увеличения содержания в мембране ФЛ и СЛ возрастают все показатели ее лабильности: повышается латеральная диффузия компонентов мембраны (из-за уменьшения взаимодействия между молекулами); увеличивается диффузия соответствующих веществ (например, неполярных соединений) через мембрану (т.к. возрастают промежутки между «хвостами» липидов); повышается способность мембран к разрыву. Все это и объясняет, почему ФЛ и СЛ называют «дестабилизирующие» липиды.

Влияние ХС и ГЛ. Данные же липиды оказывают на лабильность мембраны два противоположных действия. С одной стороны, они вносят дезорганизацию в расположение углеводородных «хвостов»: ХС — за счет внедрения между последними, а ГЛ — из-за более длинных, чем обычно, остатков нервоновой и цереброновой кислот. Это несколько дестабилизирует мембраны. Но, с другой стороны, те же факторы (наличие ХС между липидами и длинные «хвосты» ГЛ, почти лишенные двойных связей) препятствуют активному перемещению липидов. А это, напротив, оказывает стабилизирующее действие, которое в итоге и перевешивает. По данной причине ХС и ГЛ отнесены к разряду «стабилизирующих» мембранных липидов.

Поскольку во внутренних мембранах клеток этих липидов (ХС и ГЛ) очень мало, можно сделать вывод: данные мембраны более лабильны, чем внешние. Т. е. они более текучи (выше латеральная диффузия), более проницаемы и более склонны к разрыву. Все эти свойства могут меняться со временем и для одной и той же мембраны. Причиной этому обычно служит изменение ее липидного состава. Пример — мембраны сперматозоида. В них высоко содержание ФЛ с большим количеством двойных связей в «хвостах». Это, значительно лабилизирует (делает подвижными, текучими) мембраны. Кроме того, в женских половых путях секретируется белок, нагруженный ФЛ. Эти ФЛ с данного белка переходят в состав мембран сперматозоидов в обмен на ХС. Таким образом, соотношение между «дестабилизирующими» и «стабилизирующими» липидами еще больше сдвигается в пользу первых. Поэтому лабильность мембран сперматозоидов, уже и так высокая, достигает критического предела. Мембраны головок сперматозоидов - "камикадзе" легко разрываются при контакте с оболочками яйцеклетки, обеспечивая, их растворение и подготавливая оплодотворение.

Кроме лабильности, от липидного состава зависят и другие свойства мембран.

^ Различные способы «упаковки» липидов.

Образование бислоя, как мы знаем, это способ «упаковки» в водном растворе амфифильных (гидрофильность и гидрофобность одновременно в одной молекуле) липидов. Когда такой бислой формируется в экспериментальных условиях (например, после внесения указанных липидов в воду), образуются т. н. липосомы (рис. 5а).

Рис. 5. Липосомы и мицеллы.
Липосомы - это сферические пузырьки со стенкой из липидного бислоя. Внутренняя поверхность липосом, как и наружная, является полярной. Так что внутри липосомы - тоже водная среда.

Другая организация амфифильных липидов - объединение их в мицеллы (рис. 5б). Мицеллы — тоже сферические частицы, но, в отличие от липосом, они образованы только одним слоем липидов. Гидрофильные «головки» всех липидных молекул находятся на наружной поверхности частицы, а гидрофобные «хвосты» обращены внутрь, к центру мицеллы. Поэтому внутренняя среда является не водной, а гидрофобной. От чего зависит вид структуры, образуемой амфифильными липидами? Во многом - от количества «хвостов» в их молекулах, которое определяет общую геометрию последних.

Форма липидов, имеющих по два «хвоста» (см. рис. 5а), близка к цилиндрической: поперечное сечение головки примерно равно общей площади сечений двух «хвостов». В таком случае, наиболее компактной «упаковкой» молекул будет образование ими плоского бислоя. Поэтому в экспериментальных условиях формируются липосомы. Действительно, хотя липосомы и имеют сферическую форму, на расстояниях, сопоставимых с размерами липидных молекул, бислой является практически плоским. Заметим, что аналогично обстоит дело и с природными биомембранами.

Иная ситуация, если у амфифильного липида есть лишь один гидрофобный «хвост». Тогда форма молекулы приближается к конической: «головка» оказывается шире сечения «хвоста». При этом тот же принцип наиболее компактной «упаковки» диктует необходимость объединения молекул в мицеллы (рис. 5б). Диаметр мицеллы составляет примерно 5 нм, что практически совпадает с толщиной липидного бислоя. Может ли одна форма организации амфифильных липидов переходить в другую? Да, и на этом, в частности, основано гемолитическое действие змеиного яда. В последнем содержится фермент - фосфолипаза А; она отщепляет от фосфолипидов наружных мембран эритроцитов один из двух жирнокислотных остатков. Остается т. н. лизофосфатид, устойчивой формой существования которого является уже не бислой, а мицеллы. Поэтому мембраны эритроцитов разрушаются.

В то же время и липосомы, и мицеллы (только несколько иного строения) - удобные транспортные формы, которые облегчают перенос веществ в клетки или из них. Эти способы транспорта используются как самой природой, так и в медицине, причем, липосомы - для переноса водорастворимых веществ, а мицеллы - жирорастворимых.

Так, транспортные пузырьки, отпочковывающиеся от эндоплазматической сети (ЭПС) и аппарата Гольджи, а также секреторные и пиноцитозные пузырьки — все это, очевидно, липосомоподобные структуры. Отличием является лишь наличие в их стенке, помимо липидного бислоя, также встроенных в него белков.

Что же касается мицелл, то это - форма, в которой происходит, во-первых, всасывание в кишечнике продуктов переваривания жиров и, во-вторых, перенос в крови нейтральных жиров, жирорастворимых витаминов и липидов. В этих случаях мицеллообразование стимулируется соответственно, желчными кислотами и специальными белками (апопротеинами).
Дополнительная литература.

  1. Грин Н., Стаут У., Тейлор Д. Биология: В 3-х т. Т.1: Пер с англ. / Под ред Р. Сопера.- М.: Мир, 1993. С.213-224.

  2. Мушкамбаров Н.Н., Кузнецов С.Л. Молекулярная биология. М.: 2003 554 с.


Добавить документ в свой блог или на сайт

Похожие:

Конспект лекции № Тема. Субклеточный и клеточный уровни организации живого icon1. Уровни организации живого. Человек в системе природы
Определение понятия жизни на современном этапе науки. Критика метафизических и идеалистических представлений о сущности жизни. Фундаментальные...

Конспект лекции № Тема. Субклеточный и клеточный уровни организации живого iconКонтрольные вопросы к экзамену по курсу биология с экологией
Качественные особенности живой материи. Принципы организации во времени и пространстве. Уровни организации живого

Конспект лекции № Тема. Субклеточный и клеточный уровни организации живого icon1. Уровни изучения и организации жизни
...

Конспект лекции № Тема. Субклеточный и клеточный уровни организации живого iconНа биогеоценотическом и биоценотическом уровнях
По подходу к их изучению можно выделить неск основных У. о ж м на базе разных способов структурно-функц объединения составляющих...

Конспект лекции № Тема. Субклеточный и клеточный уровни организации живого iconРяд органических веществ составляют основу живого, особой сферы действительности,...
Эти свойства считаются относимыми к живому начиная с уровня клетки, однако, вопрос о происхождении живого заставляет ученых рассматривать...

Конспект лекции № Тема. Субклеточный и клеточный уровни организации живого iconМолкулярно-генетический уровень организации живого
Элементарная структура и элементарное явление молекулярно-генетического уровня организации живого

Конспект лекции № Тема. Субклеточный и клеточный уровни организации живого iconСборник тестов по курсу общей биологии для студентов 1 курса. Тема...
Тема №1 «клетка. Клеточный цикл. Деление клетки. Митоз и мейоз. Классическая генетика»

Конспект лекции № Тема. Субклеточный и клеточный уровни организации живого iconКонспект лекции №15. (паразитология 4). Тема. Основное медицинское значение хордовых
Чума, туляремия, клещевые сыпнотифозные лихорадки, таёжный энцефалит, кожный лейшманиоз, альвеококкоз

Конспект лекции № Тема. Субклеточный и клеточный уровни организации живого iconКонспект лекции № Тема. Теории возникновения жизни (биогенез). основные этапы развития биологии
Каждая из них, в определенное историческое время, считалась доказанной гипотезой и получала статус "теории"

Конспект лекции № Тема. Субклеточный и клеточный уровни организации живого iconКонспект лекции 3 Тема: объекты информационно рынка
Объектами рынка в его экономическом смысле являются разнообразные товары. Это материальные блага, соз­данные не для собственного...

Вы можете разместить ссылку на наш сайт:
Школьные материалы


При копировании материала укажите ссылку © 2013
контакты
zadocs.ru
Главная страница

Разработка сайта — Веб студия Адаманов